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氟苯尼考静注及肌注在绵羊体内的药代动力学研究
  

摘 要:健康绵羊 8 只, 随机分为 A、B 两组, A 组静注单剂量 20 mg·kg-1氟苯尼考试验品, B 组肌注单剂量 30 mg·kg-1氟苯尼考试验品。 两周后, A 组肌注单剂量 20 mg·kg-1氟苯尼考试验品, B 组肌注单剂量 20 mg·kg-1氟苯尼考对照品。用高压液相色谱法测定血浆中的药物浓度。 采用 3p97 药代动力学程序软件处理药-时数据。静注药-时数据符合三室开放模型, 主要药代动力学参数:Vd(ss)1.87±0.26 L·kg-1, T1/ 2α1.5±0.06 h, T1/ 2β19.47±7.64 h,CL(s)0.25 ±0.05 L·kg-1· h   -1, AUC77.35 ±10.24 μg·h·mL-1 ;氟苯尼考试验品肌注药-时数据符合一室开放模型,主要药代动力学参数:20 mg·kg-1剂量组 C(max)4.20 ±0.28 μg·mL-1, T1/ 2ka0.26 ±0.02 h , T1/ 2ke10.07 ±1.08 h,AUC67.47±11.02 μg·h·mL-1, F(绝对)87.22 %, F(相对)97.66%;30 mg·kg-1剂量组 C(max)7.10 ±1.84 μg·m L-1,T1/ 2ka0.26±0.10 h , T1/2ke9.57 ±3.28 h, AUC101.58±10.25 μg·h·mL-1 。 实验结果表明, 氟苯尼考试验品肌注后曲线下面积 AUC 与剂量呈比例关系, 在绵羊体内吸收好 , 分布快, 消除缓慢, 与先灵葆雅公司对照品相似。

氟苯尼考(florfenicol)是一种化学合成的抗菌药物, 作用机理和抗菌谱与甲砜霉素、氯霉素相似 ,抗菌活性优于甲砜霉素和氯霉素 ,无再生障碍性贫血等不良作用。而且 ,由于 C′-3 位的-OH 被 -F取代, 不易被耐氯霉素和甲砜霉素耐药菌株产生的乙酰转移酶破坏 ,所以对甲砜霉素和氯霉素耐药的菌株仍对氟苯尼考敏感。氟苯尼考最早由美国先灵-葆雅公司研制 ,目前已在亚洲 、欧洲、美洲的20 多个国家上市, 其剂型有注射剂、预混剂 、植入剂等,成功应用于牛、鱼和猪等动物细菌病的防治。据报道氟苯尼考对羊乳腺炎有良好治疗效果,但氟苯尼考应用于羊的药代 、药效等资料很少。本试验通过研究氟苯尼考静注 、肌注后在绵羊体内的药动学规律, 为制定给药方案提供科学依据 。

1、材料与方法

1.1 药品和试剂

氟 苯 尼 考原 料 药 (含 量98.5 %):购自浙江台州医药化工厂;氟苯尼考标准品(99.76 %)、对照品(30 %氟苯尼考溶液 , Nuflo r?):购自 美 国先 灵-葆雅 公 司;氯 霉 素对 照 品(99.6 %):购自中国兽药监察所;乙酸乙脂(分析纯):购自北京北化精细化学品有限公司 ;乙腈(色谱纯):购自 Fisher 公司 ;EDTA :购自北京化学试剂公司 。

1.2 仪器 

高压液相色谱仪(Shimadzu),配备 SCL-10Avp 系 统控 制 仪、DGU -12A 脱 气装 置、SPDM10Avp 紫外检测器和 LC -10Avp 泵 。色谱柱为 LG C18ODS 反相色谱柱(4.6 ×150 mm , 粒度 5μm)。HPLC 工作条件 :紫外检测波长为223 nm ,流动相为乙腈-水(27/73 , v/ v),流速 1.0mL·min-1

1.3 动物 

8 只绵羊, 9 ~ 12 月龄,体重30 ~35 kg ,雌雄各半,舍内饲喂不含抗菌药物的全价日粮, 自由饮水 , 试验前观察 2 周 。给药前称重、编号, 随机分为 A 、B 两组 。A 组静注单剂量 20 mg·kg-1氟苯尼考试验品 ,B 组肌注单剂量 20 mg·kg-1氟苯尼考试验品。两周后,A 组肌注单剂量 20 mg·kg-1氟苯尼考试验品 ,B 组肌注单剂量 20 mg·kg-1氟苯尼考对照品。

1.4 药液配制 

在给药前用有机溶媒将氟苯尼考配制成 30 %的注射剂 。氟苯尼考标准品用色谱纯乙腈溶解并制成1 000 mg·L-1的标准贮备液 ,临用前用双蒸水稀释成系列质量浓度的标准溶液(3.125~ 800 μg·mL-1),制备标准曲线。氯霉素对照品以适量乙腈溶解,双蒸水定容制成 1 000 mg·L-1的内标液。

1.5 给药及血样采集 

首次给药前 ,于羊侧颈静脉采 1 次空白血样 ;静注给药后 , 分别于 5 、10 、15 、30min 及1 、1.5 、2.5 、3.5 、5.5 、7.5 、10.5 和24 h 采血 ;肌注给药后, 分别于 10 、15 、30 min 及 1 、1.5 、2.5 、3.5 、5.5 、7.5 、10.5 和 24 h 采血。每次采血 5 mL左右 ,置于含 EDTA 抗凝剂的塑料管中 , 混匀, 以1 600 ×g离心 10 min ,吸取上层血浆放在塑料管中 ,-20 ℃保存。1.6 血药浓度测定 精确移取血样 1.0 mL , 加氯霉素内标液 5.0 μL 和 1.0 mL 的 PBS 液(pH7.0),涡旋混匀。再加入乙酸乙酯 4.0 mL ,水平机械振荡20 min ,静置 10 min 后吸取上层乙酸乙酯提取液于25 mL 鸡心瓶中。同法重复提取 1 次 ,合并两次乙酸乙酯提取液 , 45 ℃水浴旋转蒸发至干 。残存物中加流动相 1.0 mL ,涡旋 2 min 使溶解。转移液体1.5 mL Eppendorf 管中 , 1 600 ×g 高速离心15 min 。吸取上清液,进样检测,每次进样量为 20 μL 。1.7 标准曲线及方法研究 移取空白血浆 1.0mL ,加入 20 μL 氟苯尼考系列标准溶液和 5 μL 氯霉素内标液 。按血药浓度测定法进行提取和测定 ,以氟苯尼考峰面积与氯霉素内标峰面积的比对相应氟苯尼考浓度作线性回归 。以 0.125 μg·mL-1、1μg·mL-1和 8 μg·mL -1 3  个添加浓度测定血浆样品中氟苯尼考的回收率 、变异系数,确定最低检测限 。

1.8 数据处理 

药时数据利用中国药理学会数学专业委员会编制的 3p97 药代动力学程序软件 、采用Marquardt 法对一 、二、三房室分别以权重 1 、1/C 、1/C  23 种情况进行曲线拟合。根据 WSS 与 AIC 值来判断最适合的药代动力学模型 。

2、结 果

氟苯尼考与氯霉素内标的液相色谱峰形尖锐且对称,血浆中的杂质分离良好,无明显干扰峰。线性回归方程 y =0.38x -0.032 , 相关系数 r =0.9998 。以 0.125 μg·mL-1、1 μg·mL-1和 8 μg·mL-1 3 个添加浓度测定血浆样品中氟苯尼考回收率分别为109.8 ±5.9 %、103.5 ±3.1 %和 98.1 ±1.9 %;日内变异系数分别为 5.8 %、3.1 %和 2.2 %;日间变异系数分别为 6.3 %、3.9 %和 1.8 %。按信噪比 S/N =2计算,最低检测限为 0.025 μg·mL-1

绵羊单剂量静注和肌注氟苯尼考后, 未见不良反应。 静注给药后 , 氟苯尼考平 均血药浓度从35.19 μg·mL-1逐渐下降到 0.46 μg·mL-1(见表1)。经软件分析, 静脉注射符合三室开放模型, 血药浓度与 时 间 的 关系 可 用 下 列 方 程 表 示:C =42.57e -10.19t  +18.89e -0.46t  +1.17e -0.04t, 药时曲线见图,药代动力学参数见表 2 。

肌肉注射 20 mg·kg-1、30 mg·kg  -1氟苯尼考试验品和肌肉注射 20 mg·kg  -1氟苯尼考对照品后的平均血药浓度见表 1 。药时曲线见图, 药代动力学参数见表 3 。

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3、讨 论

3.1 静注给药的药动学特征 

健康绵羊静注氟苯尼考试验品(20 mg·kg-1)后, 最佳药动学模型为三室开放模型, 与 Lobell 等报道的在牛体内的药代动力学研究结果一致 。绵羊静注后 , 浅室分布迅速,分布半衰期为 0.06 h , 深室分布缓慢, 分布半衰期为 1.5 h 。中央室分布容积为 0.28 L·kg-1,与牛(0.18 ~ 0.47 L·kg-1)相近;而稳态分布容积为 1.87 L·kg-1, 比牛(0.767 L·kg-1)、山羊(0.98 L·kg-1) 和猪(1.53 L·kg-1) 都长 ;AUC为77.35 mg·h·L-1,说明氟苯尼考在绵羊体内分布广泛 。据报道,氟苯尼考在牛、奶山羊和猪体内消除半衰期分别为 2.3 ~ 4.11 h、2.3 h和 6.72h,本试验中氟苯尼考在绵羊体内的消除半衰期较长,为 19.47 h 。氟苯尼考在牛 、奶山羊 、马和猪体内的全身清除率分别为 0.146 ~ 0.259 L·kg-1 ·h-1 、0.486 L·kg-1 ·h-1、0.402 L·kg-1 ·h-1 和 0.23 L·kg-1·h-1, 与本试验确定的在绵羊的全身清除率(0.25 L·kg-1·h-1)相近 。Bretzlaff等认为 ,在动物体内清除率低、消除缓慢是由于氟苯尼考化学结构中-OH 被-F 取代, 阻遏葡萄糖醛酸的结合, 从而延缓了动物体内氟苯尼考的排泄。

3.2 肌注给药的药动学特征 

绵羊肌注 20 mg·kg-1、30 mg·kg-1氟苯尼考试验品后的药时数据均符合一室模型 ,与在牛、马、鸡的研究报道一致。肌注 20 mg·kg-1、30 mg·kg-1氟苯尼考试验品的药代动力学均呈一级动力学特征, 吸收较快而完全,吸收半衰期均为 0.26 h ,达峰时间也基本相同(1.38 h 和 1.36 h)。 20 mg·kg-1、30 mg·kg-1氟苯尼考试验品组血药峰浓度分别为 4.2 和 7.1 μg·mL  -1,药时曲线下面积分别为 67.47 和 101.58 mg·h·L-1,血药峰浓度及药时曲线下面积与给药剂量呈比例关系。肌肉注射后 ,氟苯尼考在绵羊体内清除缓慢, 20mg·kg-1  、30 mg·kg-1氟苯尼考试验品的消除半衰期分别为 10.07 和 9.5 h ,给药后 24 h , 血药浓度均在1 μg·mL-1以上。氟苯尼考试验品在绵羊体内吸收良好 , 20 mg·kg-1氟苯尼考试验品肌注后与先灵

葆雅公 司对 照 品的 相对 生物 利用 度 F(相对)为97.66 %。肌注 20 mg·kg-1氟苯尼考试验品的绝对生物利用度 F(绝对)为 87.22 %,比牛(78.5 %)、鸭(73.03 %)、马(81 %)和山羊 65.72 %高,比鸡(96.6 %) 和猪(96.86 %)低。

专家介绍
李秀波 

作者介绍:基础兽医学博士,副研究员,主要从事新兽药及饲料添加剂的研发工作,兼任中国第四届兽药典委员会委员、中国兽药审评委员会专家。获国家二类新兽药证书3个,获国家发明专利3项,起草兽药国家标准3项。熟练掌握日、英两门外语,参加了2010年版《中国兽药典》的编写工作和我国首部英文版《中国兽药典》的编译工作,主译《日本饲料法规》(90万字)一部,在国内外发表论文30余篇。

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