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转移因子对 PCV2 灭活疫苗免疫效果的影响
  

摘 要:为研究转移因子(TF)对 PCV2 灭活疫苗免疫效果的影响,本研究将经 ELISA 检测 PCV2 抗体水平一 致的 60 头 14 日龄健康仔猪随机分成 3 组,每组 20 头。各组仔猪分别于 14 日龄和 28 日龄肌注 PCV2 灭活疫苗 0.5 头份 / 头(单独免疫组)、PCV2 灭活疫苗 0.5 头份 / 头 + 猪用 TF 2 mg/ 头(联合免疫组)和生理盐水 1 mL/ 头(对 照组)。于第一次免疫后第 7 d、14 d、21 d、28 d、35 d、42 d、49 d、56 d、63 d 分别采血,检测血清中 PCV2 特 异性抗体水平和 IgG、IgA、IgM 浓度。结果表明:PCV2 灭活疫苗与 TF 联合免疫试验期仔猪发病率显著低于单 独免疫组(p0.05)。表明 TF 能够诱导 PCV2 灭活疫苗 快速产生抗体,缩短免疫空白期,提高免疫效果,降低发病率。 

猪 圆 环 病 毒 病 (Porcine circovirus diseases, PCVD)是危害养猪业的重要疫病之一。自 1991 年 以来,该病已给全世界养猪业造成了严重的经济损 失,我国自 2000 年报道猪群中存在 2 型圆环病毒 (Porcine circovirus type 2,PCV2)感染的血清学证据 以来,各地区陆续报道,流行范围已波及全国,阳 性率逐年上升。近年来,PCV2 有不断进化的趋 势,其致病力越来越强,目前普遍认为注射疫苗 是有效控制 PCV2 感染的重要措施之一。研究结 果显示 PCV2 疫苗具有较好的安全性和免疫保护效 力,商品化疫苗在猪场应用取得了一定的效果。 但临床应用中也发现许多不足之处,比如仔猪免疫 后存在较长的免疫空白期、免疫期不够长、免疫效 率低与安全性差的问题。为提高疫苗的免疫效果, 更有效地控制规模猪场 PCVD 的发生,有必要进行 转移因子(Transfer factor,TF)与 PCV2 灭活疫苗联合 免疫试验。

1、材料和方法 

1.1 主要实验材料

 PCV2 灭活疫苗(SH 株)购自洛 阳普莱柯生物工程有限公司(批号:120516);PCV2- SH 株由洛阳普莱柯生物工程有限公司惠赠;猪用 TF 购自大连三仪动物药品有限公司(批号:11122401); PCV2 抗体检测试剂盒购自深圳市康百得生物科技 有限公司;血清 IgG、IgA 和 IgM 检测试剂盒购自 武汉伊莱瑞特生物科技有限公司。

1.2 实验动物及试验分组

将由金华市华源牧业有 限公司提供的经 ELISA 检 测 PCV2 抗 体 水 平 一 致 (p>0.05)、体质量相近(p>0.05)的 60 头 14 日龄健康 杜洛克×(长白×大约克)仔猪随机分成 3 组,每组 20 头。各组仔猪分别于 14 日龄和 28 日龄肌注 PCV2 灭活疫苗 0.5 头份 / 头(单独免疫组)、PCV2 灭活疫 苗 0.5 头份 / 头 + 猪用 TF 2 mg/ 头(联合免疫组)和 生理盐水 1 mL/ 头(对照组)。于第一次免疫后第 7 d、 14 d、21 d、28 d、35 d、42 d、49 d、56 d、63 d 分 别经前腔静脉对试验仔猪采血,3 000 r/min 离 心 10 min,分离血清,-20 ℃保存备用。42 日龄时各 组 随 机 选 取 4 头 仔 猪(公 母 各 半), 经 口、鼻 接 种 PCV2-SH 株 2 mL,颈部肌肉注射接种 3 mL。 

试验猪常规保健、消毒和免疫,自由采食,自 由饮水,环境条件一致,专人负责饲养管理。

1.3 测定项目 

1.3.1 血清中PCV2 特异性抗体水平检测 

采 用 PCV2-ELISA 抗体检测试剂盒检测各组血清样本中 PCV2 特异性抗体水平(按试剂盒说明书进行操作)。 

1.3.2 血清 IgG、IgA 和 IgM 检测 

血清免疫球蛋 白(IgG、IgM、IgA)含量测定采用免疫浊度法,用免 疫球蛋白试剂盒在 RX DAYTONA 全自动生化分析 仪上测定(按试剂盒说明书进行操作)。

1.3.3 仔猪生长性能的测定

分别于试验开始和试 验结束当天称量仔猪空腹体质量,记录每天每组试 验仔猪采食量。计算各阶段的平均日增重(ADG)和 各个阶段的料重比(RFW)。若出现仔猪死亡,其死 亡时体质量计为试验末重。每天观察试验猪的发病 情况,出现精神沉郁、食欲不振、便秘或腹泻、咳 嗽、气喘或呼吸困难、体温升高等均记为发病。 

1.4 数 据 处 理 

对所测数据采用 EXCELL 及 SPSS17.0 数据分析软件进行统计分析处理。 

2、结 果

2.1 TF 与 PCV2 灭活疫苗联合免疫对仔猪生长性能的影响 

通过对试验猪称重和耗料统计(表 1), 联合免疫组比单独免疫组仔猪试验期平均日增重提  高 4.96 %,差 异 不 显 著 (p>0.05), 比 对 照 组 提 高  11.19 %,差异显著(p<0.05),单独免疫组比对照组 平均日增重提高 5.94 %,差异显著(p<0.05)。联合 免疫组仔猪试验期料重比比单独免疫组降低 5.59 %,  差异不显著(p>0.05),比对照组降低 19.22 %,差异 极显著(p<0.01);单独免疫组比对照组仔猪试验期料重比降低 14.44 %,差异显著(p<0.05)。试验结果  表明,注射 PCV 疫苗能够显著提高仔猪生长性能, TF 与 PCV2 灭活疫苗联合免疫对提高仔猪生长性能  效果更明显。  

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2.2 TF 与 PCV2 灭活疫苗联合免疫对仔猪发病率的影响

观察试验猪临床症状,对发病率进行统计  分析(表 2),联合免疫组仔猪发病率显著低于单独  免疫组(p<0.05),极显著低于对照组(p<0.01),单独  免疫组发病率极显著低于对照组(p<0.01)。结果表  明,TF 与 PCV2 灭活疫苗联合免疫能够极显著降低  仔猪发病率。 

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2.3 TF 与 PCV2 灭活疫苗联合免疫对仔猪血清中 PCV2特异抗体水平的影响 

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采 用 ELISA 检 测PCV2 特异性抗体水平(图 1),单独免疫组于首免后  抗体水平开始下降,至第 14 d 下降至最低点,14 d  后抗体水平开始快速上升,至 35 d 抗体水平缓慢上  升,56 d 达到峰值后开始缓慢下降。联合免疫组于  首免后抗体开始下降,至第 7 d 抗体开始上升,之  后一直上升直至试验结束,并且首免后第 7 d 开始  整个试验期抗体水平均高于单独免疫组,其中第 49 d  抗体水平提高 17.24%,差异显著(p<0.05)。表明 TF  可以协同疫苗有效诱导机体产生特异性的体液免疫  应答,快速产生抗体,缩短免疫空白期,提高免疫  效果。而对照组 PCV2 抗体水平始终处于下降趋势,  至试验后 42 d (56 日龄)抗体水平开始上升,一直维  持到试验结束(试验后 63 d),可能仔猪于 56 日龄左  右受到野毒的感染。

2.4 TF 与 PCV2 灭活疫苗联合免疫对仔猪血清中 IgG的影响 

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采用免疫浊度法测定仔猪血清中IgG浓度,图2显示,仔猪在注射疫苗前,各组血清中抗 PCV2 抗体 IgG浓度均较高,此时仔猪体内的抗体可能来源于母乳。IgG 浓度在接种疫苗后开始下  降,单独免疫组IgG于第14d下降到最低,之后开始逐渐上升直至56d,然后有下降趋势。联合免疫组 IgG 水平于免疫后开始下降,第7d开始上升,至21d开始快速上升,然后一直维持缓慢上升直至试验结束。整个试验期,联合免疫组 IgG 浓度始终高于单独免疫组,其中28d、35d和42d IgG浓度分别提高50.06%、47.72%和30.58%,差异极显著(p<0.01),14d、21d 和 49d IgG浓 度分别提高27.78%、25.98%和 24.23%,差异显著(p<0.05)。对照组随着仔猪日龄增大,IgG浓度逐渐下降,至 56日龄(试验开始后42d)开始快速上升,这与抗PCV2 抗体检测结果一致,可能仔猪于56日龄左右受到野毒的感染。

2.5 TF 与 PCV2 灭活疫苗联合免疫对仔猪血清中IgA 的影响 

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采用免疫浊度法测定仔猪血清中 IgA 浓度,图 3 显示,两试验组仔猪血清中 IgA浓度在注射疫苗后均开始下降,第7d 时下降到最低,之后开始上升,并且一直稳定在比免疫前略高的浓度。联合免疫组血清中 IgA 浓度比单独免疫组有所提高,但差异不显著(p>0.05)。对照组 IgA 浓度一直处于较低浓度,免疫后两周开始极显著低于免疫组  (p<0.01)直至试验结束。表明仔猪免疫 PCV-2 灭活疫苗后能极显著提高血清中 IgA 浓度,并且TF与PCV-2 灭活疫苗联合免疫比 PCV-2 灭活疫苗单独免疫仔猪血清 IgA 浓度有所提高。  

2.6 TF 与 PCV-2 灭活疫苗联合免疫对仔猪血清中gM的影响 

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采用免疫浊度法测定仔猪血清中 IgM 浓度,图4显示,血清中 IgM 浓度变化趋势与 IgA 大致相同,在第一次免疫后 7 d 内下降,7 d 时下降  到最低,14 d 时 IgM 浓度上升,之后一直稳定在比免疫前略高的抗体水平,并且联合免疫组血清中  IgM 浓度比单独免疫组均有所提高,但差异不显著  (p>0.05)。对照组 IgM 浓度一直处于较低水平,免疫后 3 周开始极显著低于免疫组(p<0.01)直至试验  结束。表明转移因子与 PCV-2 灭活疫苗联合免疫比PCV-2 灭活疫苗单独免疫能够提高仔猪血清 IgM 浓 度,能极显著提高对照组仔猪 IgM 浓度。

3、讨 论

 B 淋巴细胞产生的抗体是体液免疫的主要组成部分,其主要以血液循环系统中的免疫球蛋白(主要 是 IgM 和 IgG) 或者以消化道或肺部上皮细胞表面的免疫球蛋白(主 要 是 IgM 和 IgA)的 形 式 存 在, 免疫球蛋白(IgG、IgA 和 IgM)水平反映了机体抵抗

外界病原侵袭的能力。结合了病毒的抗体能够进入细胞内部,并在细胞内通过与胞液中的高效 IgG 受体(TRIM21)结合来介导细胞内的免疫反应。TF 与猪 PCV2 灭活疫苗联合免疫后能够显著或极显著提高 IgG 浓度,表明 TF能够协同或增强猪 PCV2灭活疫 苗产生抗体的效价,提高抗 PCV2感染的能力。

TF 是白细胞中具有免疫活性的 T 淋巴细胞所释放的一类小分子可透析物质,具有广泛的免疫学调节活性、非特异性免疫学活性和特异性免疫学活性,在兽医临床上已有应用报道。黄建文等用传染性喉气管炎油乳剂疫苗免疫时,发现添加TF的试验组产生的保护力时间要比疫苗组提前,并且保护期长,淋巴转化率高;李犹平等研究显示,牛脾 TF 可以增强猪瘟疫苗的免疫效果。本实验用 TF 与 PCV 灭活疫苗联合应用表明,TF 可以用作 猪的免疫增强剂,将供体的细胞免疫信息转移给受体,使受体的淋巴细胞增殖分化为致敏淋巴细胞,不仅能够诱导机体产生强而持久的免疫反应,而且能够快速、显著提高 PCV2 灭活疫苗的免疫效果, 降低仔猪发病率。 

已有研究表明,PCV-2 具有免疫抑制特性,感 染 PCV-2 后,猪的淋巴结和肾上腺等受损严重,导 致机体对疫苗的不应答现象。TF 能够活化淋巴细胞 表 面 受 体 功 能,解 除 免 疫 抑 制。因 此,TF 联 合 PCV-2 灭活疫苗使用,能够取得比 PCV-2 灭活疫苗 单独使用更显著的效果。

专家介绍
章红兵 

作者介绍:教授,全国农业职业教育教学名师,动物疫病防治高级技师、“动物疫病防治员”和“动物检疫检验员”国家高级考评员、国家执业兽医师,中国兽医协会会员、浙江省畜牧兽医学会养猪分会理事、金华市养猪行业协会理事,主要从事猪病防治方面的教学与研究。

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